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细胞内活性氧 ROS 的检测

       活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OHHydroxyl radical)、单线态氧(1O2Singlet oxygen)、超氧阴离子 (•O2-Superoxide anion)、过氧化自由基 (ROO• Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
        活性氧 (reactive oxygen species,ROS) 的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有 泄露” 的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:泄露” 的电子*初和氧气反应生成超氧阴离子自由基 (O2·-)(图 1A)。超氧阴离子遇水生成 H2O2(图 1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶 (monoamine oxidase,MAO) 的作用下生成 (图 1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO) 的催化下与 Cl-反应可生成 ClO-(图 1D),在铁或铜离子的催化下发生 Fenton 反应生成 OH·(图 1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成 ONOO-(图 1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
         贝博 TM BBcellProbeTM 活性氧检测试剂盒 BB-4705 是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成 DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜,从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存在的条件下,DCFH 被氧化生成荧光物质 DCF,绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比,检测 DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
在激发波长 502 nm,发射波长 530 nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测 DCF 荧光,从而测定细胞内活性氧水平。
         本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂,以便于活性氧的检测。

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